皂土提取缓冲液怎么配制?5 mmol/L柠檬酸钠(pH7.0), 10 mmol/L EDTA,100 mmol/L

Question

如题所述

Answer 1

【原
理】
将分散好的真核生物组织、细胞在含SDS和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质。破坏细胞膜、核膜，SDS可使组织蛋白与DNA分子分离，EDTA能抑制细胞中DNase的活性，使DNA分子完整地以可溶形式存在于溶液中，再用酚、氯仿/异戊醇抽提除去蛋白质，（氯仿可除去DNA溶液中微量酚的污染，异戊醇还可减少蛋白质变性操作过程中产生气泡）得到的DNA溶液经乙醇沉淀进一步纯化，为获得高纯度DNA，操作中常加入RNase除去RNA，此法可获得100~200kb的DNA片段，适用于构建真核基因组文库，Southern
blot分析。
【试
剂】
1、组织细胞裂解液
100~200μg/ml
蛋白酶K
10mmol/L
Tris－Cl（pH8.0）
0.1mol/L
EDTA
(pH8.0)
0.5%
SDS
20
μg/ml
RNase
A
2、平衡酚（用0.5mmol/L
Tris－Cl饱和，pH8.0），
3、氯仿/异戊醇（24：1v/v）
4、3mol/L乙酸钠（NaAc，pH5.2）
5、冷无水乙醇（AR）
6、70%乙醇（-20℃静置）
7、TE缓冲液（10mmol/L
Tris－Cl、1mol/L
EDTA
(pH8.0)