1975年Kohler和Milstein的单克隆抗体技术在生产和使用抗体方面开创了新纪元，如图示单克隆抗体制备流程阶

Question

1975年Kohler和Milstein的单克隆抗体技术在生产和使用抗体方面开创了新纪元，如图示单克隆抗体制备流程阶段示意简图．请据图回答下列问题：（1）该技术是在动物细胞培养技术和______技术的基础上发展起来的．（2）图10中细胞A体外培养不具有分裂能力，但能分泌______，细胞B体外培养能够______．（3）动物细胞融合常用的方法是______．（4）细胞融合是随机的过程，在HAT培养基中培养，要筛选出______细胞．在细胞培养过程中，为了促进细胞摄取葡萄糖，常向培养液中加入______（激素）．（5）培养2周后，即测定培养细胞的特征，筛选出______的细胞置于不同孔内（如图所示）培养．此操作前要将培养细胞稀释到7～10个细胞/ml，每孔滴入0.1ml细胞稀释液，其目的是______．（6）要获得大量的单克隆抗体，可对获得的杂交瘤细胞进行______培养．

Answer 1

（1）单克隆抗体的制备技术首先要利用动物细胞融合将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，然后要利用动物细胞培养技术对融合的细胞进行筛选，筛选出杂交瘤细胞，再进行培养．
（2）图中细胞A为经过免疫的B淋巴细胞，该细胞不具有分裂能力，但能分泌特异性抗体．细胞B为骨髓瘤细胞，该细胞能够无限增殖．
（3）动物细胞融合常用的方法有物理法（离心、震动、电刺激）、化学法（PEG）、生物法（灭活的病毒）．
（4）HAT培养基是选择培养基．由于细胞融合的结果可能有三种情况：B淋巴细胞自身融合细胞、骨髓瘤细胞自身融合细胞、杂交瘤细胞，因此需要用HAT培养基筛选出杂交瘤细胞．胰岛素具有促进组织细胞加速摄取利用葡萄糖的作用，因此在细胞培养过程中，常向培养液中加入胰岛素．
（5）培养2周后，筛选出能产生特异性抗体的骨髓瘤细胞细胞置于不同孔内培养．此操作前要将培养细胞稀释到7～10个细胞/ml，每孔滴入0.1ml细胞稀释液，其目的是 保证每个孔内不多于一个细胞，达到单一细胞培养以保证抗体的纯度的目的．
（6）要获得大量的单克隆抗体，可对获得的杂交瘤细胞注射到小鼠的腹腔中进行体内培养，也可利用动物细胞培养技术进行体外培养．
故答案为：
（1）动物细胞融合            
（2）分泌特异性抗体    无限增殖
（3）PEG（灭活的病毒、电刺激）     
（4）杂交瘤      胰岛素
（5）特异性分泌抗X蛋白抗体的     保证每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的（单一细胞培养以保证抗体的纯度）
（6）体外或体内（体外和体内、体外、体内）