SDS-PAGE（十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）
试剂
1、电泳缓冲液（5×Tris-Glycine Buffer）：Tris 15.1g，Glycine 94g，SDS 5.0g，用800ml水进行溶解，定容至1L，室温保存。
2、30%丙烯酰胺：丙烯酰胺29g，N,N’-亚甲双丙烯酰胺1g，用60ml水于37℃水浴溶解，定容至100ml，滤纸过滤，置棕色瓶室温保存。
3、1.5mol/L Tris（pH8.8）：Tris碱18.165g，用80ml水进行溶解，待溶液冷却至室温，用浓HCl调pH至8.8，定容至100ml，室温保存。
4、1.0mol/L Tris（pH6.8）：Tris碱12.11g，用80ml水进行溶解，待溶液冷却至室温，用浓HCl调pH至6.8，定容至100ml，室温保存。
5、10%SDS（pH7.2）：SDS 100g，用900ml水进行溶解（加热至68℃可助溶），用浓HCl调pH至7.2，定容至1L，室温保存。
6、10%过硫酸铵：过硫酸铵0.1g，用1ml水进行溶解，4℃保存两周，常现配现用。
7、5×SDS凝胶加样缓冲液：1MTris-HCl（pH6.8）1.25ml，SDS 0.5g，BPB 25mg，甘油2.5ml，用水溶解后定容至5ml，室温保存。
8、染色液：甲醇：水（1：1，v/v）90ml，冰乙酸10ml，考马斯亮蓝R250 0.25g，滤纸过滤。
9、脱色液：即不加染料的染色液。
SDS-PAGE的有效分离范围 丙烯酰胺浓度（%） 线性分离范围（kD） 15 12~43 10 16~68 7.5 36~94 5.0 57~212 制胶：薄胶需分离胶约4ml、积层胶约2ml，厚胶需分离胶约6ml、积层胶约3ml。 15%分离胶 5ml 10ml 15ml 水 1.1 2.3 3.4 30%丙烯酰胺 2.5 5.0 7.5 1.5mol/L Tris（pH8.8） 1.3 2.5 3.8 10%SDS 0.05 0.1 0.15 10%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 TEMED 0.002 0.004 0.006 12%分离胶 5ml 10ml 15ml 水 1.6 3.3 4.9 30%丙烯酰胺 2.0 4.0 6.0 1.5mol/L Tris（pH8.8） 1.3 2.5 3.8 10%SDS 0.05 0.1 0.15 10%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 TEMED 0.002 0.004 0.006 10%分离胶 5ml 10ml 15ml 水 1.9 4.0 5.9 30%丙烯酰胺 1.7 3.3 5.0 1.5mol/L Tris（pH8.8） 1.3 2.5 3.8 10%SDS 0.05 0.1 0.15 10%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 TEMED 0.002 0.004 0.006 5%积层胶 2ml 3ml 5ml 水 1.4 2.1 3.4 30%丙烯酰胺 0.33 0.5 0.83 1.0mol/L Tris（pH6.8） 0.25 0.38 0.63 10%SDS 0.02 0.03 0.05 10%过硫酸铵 0.02 0.03 0.05 TEMED 0.002 0.003 0.005 上样：一般取样10μl。
1、菌液（以大肠杆菌为例）：取1ml菌液，8000rpm离心3min收集菌体，生理盐水洗涤2次，加蒸馏水50μl，加2×上样液50μl，吹打混匀，沸水浴10min，瞬时离心。
2、蛋白溶液：取蛋白溶液10μl，加2×上样液10μl，沸水浴5min，瞬时离心。
电泳：先60V电泳10～20min至样品泳至积层胶和分离胶的分界处，然后110～120V电泳至样品泳到凝胶末端。
染色与脱色：将凝胶浸泡在至少5倍体积染色液，沸水浴10min染色，然后将凝胶转移至脱色液，平缓摇动4~8小时。此外，也可将凝胶直接浸泡在预冷的0.25MKCl中轻轻振摇，染色10~20min可见白色条带。
保存凝胶：脱色后的凝胶可浸于水中，长期封装在塑料袋内，注意不应将凝胶保存于脱色液，否则染色的蛋白带会褪色。
