第1个回答 2017-03-06
一、SDS-PAGE电泳所用溶液：
1）30 %聚丙烯酰胺溶液 (100 mL)
丙烯酰胺 (Arc) 29 g
N,N’-亚甲双丙烯酰胺 (Bis) 1 g
用双蒸水定容至100mL，过滤备用，4℃存放
丙稀酰胺29.2g，N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g，加入去离子水定容至100mL，pH值不能超过7.0，过滤于棕色玻璃瓶中4℃贮存。
2）5×Tris-甘氨酸缓冲液 (1 L)
Tris碱 15.1 g
甘氨酸(电泳级) 94 g
10 %SDS 50 mL
使用时稀释5倍使用
3）2×SDS凝胶加样缓冲液(10mL)
0.5 mol/L Tris-Cl (pH 6.8) 2 mL
10％(W/V)SDS 4 mL
甘油 2 mL
β-巯基乙醇 1.0 mL
(DTT（二硫苏糖醇） 0.31g)
溴酚兰 0.02g
双蒸水 0.5 mL
室温存放备用
4）考马斯亮蓝染色液
考马斯亮蓝R-250 （G-250） 1.0 g
甲醇 450 mL
冰醋酸 100 mL
ddH2O 450 mL
0.2g考马斯亮蓝R250+84mL 95％乙醇+20mL冰醋酸，定容至200mL，过滤备用
5）考马斯亮蓝脱色液（甲醇脱色液效果好，但有毒性）
甲醇 100 mL
冰醋酸 100 mL
ddH2O 800 mL
医用酒精：冰醋酸：水=4.5：0.5：5(V：V：V)
二、SDS-PAGE所需溶液:
A液——30％丙稀酰胺（W/V）：丙稀酰胺29.2g，N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g，加入去离子水定容至100mL，pH值不能超过7.0，过滤于棕色玻璃瓶中4℃贮存。B液——1.5mol/L Tris·HCl，pH8.8：18.17g（9.09g）Tirs碱，溶于80mL（40mL）去离子水中，加入约3mL(1.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至8.8，定容至100mL（50mL）。C液——1.5mol/L Tris·HCl，pH6.8：12.1g（6.05g）Tirs碱，溶于80mL（40mL）去离子水中，加入约7mL(3.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至6.8，定容至100mL（50mL）。D液——10％SDS：10g (2g)SDS溶于去离子水中，定容至100mL(20mL)，加热至68℃助溶。E液——10％过硫酸铵：5g(0.5g)过硫酸铵，溶于50mL(5mL)去离子水中；现配现用或分装至0.5mL离心管中冷冻备用。
F液——TEMED(N-N-N`-N`－四甲基乙二胺)原液，室温保存。
三、配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液
表1.配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液
成分
配制不同体积和浓度凝胶所需各成分的体积/mL
5
10
15
20
25
30
40
50
10 %胶
水
1.9
4.0
5.9
7.9
9.9
11.9
15.9
19.8
30 %丙烯酰胺混合液
1.7
3.3
5.0
6.7
8.3
10.0
13.3
16.7
1.5 mol/L Tris(pH8.8)
1.3
2.5
3.8
5.0
6.3
7.5
10.0
12.5
10 % SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
10 % 过硫酸铵
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
TEMED
0.002
0.004
0.006
0.008
0.01
0.012
0.016
0.02
12 %胶
水
1.6
3.3
4.9
6.6
8.2
9.9
13.2
16.5
30 %丙烯酰胺混合液
2.0
4.0
6.0
8.0
10.0
12.0
16.0
20.0
1.5 mol/L Tris(pH8.8)
1.3
2.5
3.8
5.0
6.3
7.5
10.0
12.5
10 % SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
10 % 过硫酸铵
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
TEMED
0.002
0.004
0.006
0.008
0.01
0.012
0.016
0.02
表2. 配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶所用溶液
成分
配制不同体积和浓度凝胶所需各成分的体积/ml
1
2
3
4
5
6
8
10
水
0.68
1.4
2.1
2.7
3.4
4.1
5.5
6.8
30 %丙烯酰胺混合液
0.17
0.33
0.5
0.67
0.83
1.0
1.3
1.7
1.5 mol/L Tris(pH6.8)
0.13
0.25
0.38
0.50
0.63
0.75
1.0
1.25
10 % SDS
0.01
0.02
0.03
0.04
0.05
0.06
0.08
0.1
10 % 过硫酸铵
0.01
0.02
0.03
0.04
0.05
0.06
0.08
0.1
TEMED
0.001
0.002
0.003
0.004
0.005
0.006
0.008
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