如图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图．图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ

Question

如图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图．图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，EcoRⅠ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8Kb）等为限制酶及其切割的位点与复制原点的距离，1Kb=1000个碱基对长度．请据图回答：（1）质粒A、C不能作为目的基因运载体的理由分别是______、______．（2）将图中的目的基因与质粒B进行重组，需要用到______酶．如果是两两重组，可能有______种长度的重组结果．（3）基因工程中检测筛选含有目的基因的重组质粒是一个重要的步骤．现运用______酶切质粒，完全酶切后进行电泳观察，若出现长度为1.1kb和______kb，或者______kb和______kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRⅠ的识别位点之间的碱基对忽略不计）．

Answer 1

（1）由图可知，质粒A中缺少标记基因，质粒B中的复制原点被酶切割，所以A、C不能作为运载体．
（2）由图可知，获取目的基因使用的限制酶是PvuⅠ，所以切割质粒B也用该限制酶，同时目的基因与运载体连接的时候还需要DNA连接酶．用DNA连接酶连接时，可能出现质粒环化、目的基因环化、形成重组质粒，有3处长度的结果．
（3）根据题意，质粒长度为2.7kb，目的基因长度为4.0kb，所以重组质粒长度为5.7kb，出现长度为1.1kb，则另一个长度为5.6kb，若目的基因重组时倒置，可形成3.1kb和3.6kb的片段．
故答案为：
（1）缺少标记基因    复制原点被限制酶切割
（2）限制酶（PvuⅠ）和DNA连接酶   3
（3）EcoRⅠ5.6    3.1    3.6