PCR产物片段链接到T载体上后,PCR片段是否会出现两种连接方向

Question

如题所述

Answer 1

PCR产物片段链接到T载体上后，PCR片段是会出现两种连接方向。

如果用1%的琼脂糖电泳30min，主带（超螺旋的闭环质粒dna）会在3kb-2kbmarker之间，如果是单酶切产物，则应该在3.5kb的marker附近。要连接到载体上，形成带有PCR目标片段的质粒，将这个质粒导入受体菌，才能检测这个片段的活性、作用等等。

摘要

从固体平板挑取转化带有目的基因的单菌落，用特异引物通过聚合酶链式反应可直接扩增和标记目的基因，不需经过菌的液体培养、质粒提取和酶解反应等复杂过程，能快速获得目的基因扩增产物和进行目的基因探针的标记。

探针是核酸分子杂交及分子标记研究进行的必要前提，在Southern blot、Northern blot、ALFP、 RFLP、RAPD、SSR等技术中得到了广泛应用，在分子生物学的研究中充分发挥着作用，尤其对核酸分子操作具有十分重要的意义。