大巴车凌晨2点到5点不能上高速。
高速强制实行长途客车凌晨2点至5点休息制度，凌晨2点以后禁止长途客车从收费站口上高速，对此时间段内正在高速公路上行驶的长途客车就近引导到服务区或客运站停车休息。凌晨2点到5点禁止长途客运车辆上高速的最主要原因是，避免司机疲劳驾驶，导致交通事故的发生。
因为有很多长途客运车辆发生的交通事故都与夜间行车疲劳驾驶有很大的关系，于是交通管理部门就制定了此条规定。所以对于在凌晨2点前进入高速公路的长途客运车辆，在禁行时间内也是不可以继续行驶的，只能到附近的服务区进行休息，到可以通行的时间才可以继续在高速上行驶。
行驶大巴车的注意事项
1、出车前一定要检查车辆状况及安全装备
如转向、制动系统是否正常，轮胎是否完好，应急出口是否通畅等，尤其要配齐应急安全锤、灭火器、故障车警告标志牌等装备，在紧急情况下，这些装备能帮助驾驶人和乘客赢得逃生的时间，摆脱险境。
2、开车要系好安全带
安全带在车辆发生碰撞、紧急制动或发生侧翻时，能将驾驶人和乘客牢牢固定在座位上，防止人体与车挡风玻璃或车体发生碰撞造成伤害，从而对驾驶人和乘客起到保护作用。客运驾驶人不仅要率先规范使用安全带，还要督促乘客系上安全带，保证车上每个乘客都系好安全带再出站，让系安全带成为驾乘人员共同的自觉行为。
3、杜绝超员和携带危化品上车
客车超员后，负荷加重，制动距离加长，转向性能减弱，易导致交通事故。危险化学品具有特殊的物理、化学性质，极可能发生泄漏、燃烧、爆炸等事故。同时，由于超员或车内有危化品，一旦发生事故，往往会加重损害后果。
4、起停要稳、操作要细致、谨慎，过弯要减速
客运车辆载人驾驶由于乘员多，所以要避免急起急刹，以防乘客出现意外。起步前应预告乘员，挂低速挡缓加油门平稳起步。停车前切莫挂空挡滑行，应提前制动减速，逐渐靠向停车位置，同时轻踩制动平稳驻停。除紧急情况外，不可使用紧急制动。