为什么用Tris氯化钠来复溶蛋白沉淀

Question

如题所述

Answer 1

使用Tris-NaCl来复溶蛋白沉淀主要有以下几个原因：

Tris是一种常用的缓冲液成分，能够提供稳定的pH环境，有助于保持蛋白质的稳定性和活性。在蛋白质复溶过程中，稳定的pH环境对于防止蛋白质变性或聚集非常重要。

NaCl（氯化钠）在蛋白质复溶过程中起到调节离子强度的作用。离子强度对于蛋白质的溶解度和稳定性具有重要影响。通过调节NaCl的浓度，可以改变蛋白质的溶解度，从而实现蛋白质的复溶。

Tris-NaCl缓冲液还具有较低的非特异性吸附，这有助于减少在蛋白质复溶过程中可能出现的损失。

Tris-NaCl缓冲液中的成分还具有抑制蛋白质降解酶活性的作用，有助于保持蛋白质的完整性。

使用Tris-NaCl来复溶蛋白沉淀可以提供稳定的pH环境、调节离子强度、减少非特异性吸附和抑制蛋白质降解酶活性，从而有助于保持蛋白质的稳定性和活性，提高复溶效率。

需要注意的是，在具体实验中应根据蛋白质的特性和实验需求来选择适合的缓冲液成分和条件。

Answer 2

由相信,浓度越高,对保存蛋白质越有利.加入 PEG 和更换 缓冲液种类是一种值得试验的方法,但结果如何还在两可之间,没试过就不会知道.
镍柱下来以后,溶液中混有相当多咪唑和议定含量的Ni,都有可能引起蛋白质不稳定变性沉淀.
我在纯化一种蛋白质时,也遇到过相同的情况,虽然蛋白质不同,但是也许能有帮助.
镍柱后,用含 EDTA 的缓冲液透析,除去 Ni ,再过 DEAE 离子交换柱,之后透析再浓缩,分装小管,-80度保存.一次使用一支.
理论上说蛋白质应在高浓度情况下保存,但当缓冲溶液中含有大量盐而且目的蛋白中含有大量输水氨基酸的情况下,高浓度就不利于保存.
在这种情况下,如果你不想太多的稀释蛋白,可以选择适当脱盐,如透析、凝胶过滤、超滤等,但应保持缓冲液具有一定的离子强度（500mM NaCl这个浓度太高,可以降到100）,如果还不行的话,可以添加甘油至终浓度5%左右.
Ni纯化最好不要用Tris,可能会影响Ni的结合.追问

答非所问