荧光发射发生在三重态。
在某一激发重态，各个激发态先振动弛豫到该激发，到最低能级后才发射荧光单重态或磷光三重态。磷光的产生是由第一激发单重态的最低振动能级，通过系间窜越至第一激发三重态，在经过振动弛豫，转至其最低振动能级而发散的，系间窜动是自旋禁阻的，因而其速率常数小得多。
间接测定法
不管是直接测定，还是间接测定，一般的采用标准工作曲线法，取各种已知量的荧光物质，配成一系列的标准溶液，测定出这些标准溶液的荧光强度，然后给出荧光强度对标准溶液的浓度的工作曲线。在同样的仪器条件下，测定未知样品的荧光强度，然后从标准工作曲线上查出未知样品的浓度（即含量）。