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用pcr产物二次pcr
二次PCR
什么意思
答:
就是觉得用已经反应完的
pcr产物
,用相同的引物重新进行扩增,得到跟多的产物。但是扩增时应注意体系,不然扩增产物的电泳图会出现严重的拖尾现象。
PCR产物
回收后,作为再次
PCR的
模板,为什么不可以?我反复扩增几次都失败...
答:
可以直接在
PCR产物
上加-A,体系是(PCR回收产物,Taq酶,水,dATP,Taq PCR buffer),直接72度延伸20min即可。如果你仍想继续以回收产物为模板,那么要先检测你的条带是否为目的基因或是否有回收到产物,如果是目的基因,那么用它做模板,浓度不需要太严格,你电泳检测一下再扩增试试。
问一下,我想稀释
PCR产物
(10倍,100倍,1000倍)进行
二次PCR
,怎么操作?
答:
比如吸取1ul加入到9ul水里,再取稀释10倍的1ul加入到9ul水你里面,以此类推 再有他所说的影响一般在稀释后不会存在,一般35个循环的话,稀释一百倍是我的经验值,当然一万倍都是可以的
问一下,我想稀释
PCR产物
(10倍,100倍,1000倍)进行
二次PCR
,怎么操作?
答:
这个简单唉,
使用
梯度稀释法 原液 (A)原液1ul+9ul水——稀释10倍 (B)B剩下9ul B的1ul+9ul水——稀释100倍(C)C剩下9ul C的1ul+9ul水——稀释1000倍(D)D有10ul 分别作为模版
PCR
即可!!
pcr产物
条带很浅可以再进行一次扩增吗
答:
可以的,如果没有杂带的话,直接纯化
PCR产物
,作为模板可以再进行PCR
二次PCR产物
,电泳条带与第一次PCR一样不明显,如何解决
答:
首先你的确认你没有用错东西。如果没有问题,
二次PCR的
话,那得看你的延伸时间和退火温度了。2轮的退火温度最好调高些,以增强特异性。延伸时间上,看你的
产物
大小。如果需要大条带,那延伸时间意义不大,最好能对一轮产物进行预期条带的回收后再做2轮,或者进行巢式PCR;要是需要小条带那就简单...
请教:
二次PCR
怎么做
答:
二次PCR
是可行的,对第一次的PCR进行胶回收,再次进行PCR,条件一般不需要变化。DNA本身的二级结构可能导致
PCR的产物
条带很暗,有时需要进行二次PCR,我这样做过,也成功了。
求助:关于
二次PCR
问题
答:
就是用第一
次PCR的产物
作为模板,用相同的引物进行第
二次
扩增。
为什么要进行
二次PCR
?
答:
这主要决定于你第一
次PCR的
产量,产量高(电泳可见扩增带)稀释1000-10000倍,产量低时倍数可以低一些,100-500就可以了。一般情况下,你可以试试100和1000这两个稀释倍数。
用巢式
PCR
第
二次
扩增时,出现多条条带,如何解决?
答:
博凌科为-为你解答:既然第一次条带特异了,还要做第二次扩增吗?如果怀疑第一次引物造成了两次引物之间相互配对引起多条带扩增,建议第
二次PCR
做个交叉实验做对照,就知道是不是混合引起了。如果是混合引起,建议:减少第一次引物的量,并增加循环次数,尽量消耗完首次引物。
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