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用pcr产物二次pcr
PCR
扩增的反应特点
答:
能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,
PCR的
灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中最小检出率为3个细菌。简便、快速 PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增
产物
一般用...
在基因工程中通常需要
利用PCR
技术扩增目的基因,其原理与细胞内DNA复 ...
答:
即⑤.如果经过n次循环,则
产物
中①所示DNA分子数为1个.(5)单独用EcoRV可将质粒切成一段,说明在其上有一个EcoRV切点.单独
使用
MboI能将环状质粒切成2.5kb和11.5kb两段,说明在质粒章有两个MboI切点,且切点在2.5kb和11.5kb之间.两者共同使用时,环状质粒被切成三段,说明在质粒上共有三个...
基因突变检测方法
答:
如K-ras基因第12密码子的BstNI位点,第13密古巴子有BgⅠⅡ位点。用链续二次的巢式PCR来扩增包括K-ras第12、13密码子的DNA片段,在两次扩增反应之间用相应的内切酶消化扩增的DNA片段,野生型因被酶切而不能进入第
二次PCR
扩增,而突变型则能完整进入第二次PCR扩增并得到
产物
的富集。
在
PCR
技术中,循环四次后为什么会得到11条目的基因?是不是也算上了第二...
答:
公式:m=2^n-n-1 m为目的基因数,n为循环次数u
pcr
需要注意的问题
答:
所用离心管及样进枪头等均应一次性
使用
。必要时,在加标本前,反应管和试剂用紫外线照射,以破坏存在的核酸。二是空气中的小片段核酸污染,这些小片段比靶序列短,但有一定的同源性。可互相拼接,与引物互补后,可扩增出
PCR产物
,而导致假阳性的产生,可用巢式PCR方法来减轻或消除。4、出现非特异性...
PCR产物
克隆实验操作步骤?
答:
在
采用
大量T4DNA连接酶并配以5—10u T4 RNA连接酶时,可显著提高其连接效率。对于较短
PCR产物
,用PUS19 的HincⅡ位点进行克隆,以X-gal和IPTG筛选,常可得到足量重组 子。另一种提高克隆效率的途径是先用Klenow大片段或T4DNA聚合酶 消去3"末端突出碱基将PCR产物变成平端DNA,然后再用平端连接法 ...
学
pcr
技术需要哪些基础
答:
对于较短靶基因(长度为100~300bp时)可
采用二
温度点法, 除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一,一般采用94℃变性,65℃左右退火与延伸(此温度Taq DNA...循环次数 循环次数决定
PCR
扩增程度。PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。一般的循环次数选在30~40次之间,循环次数越多,非特异性
产物
的量亦随之增多。
PCR
纯化目的基因漂洗液为什么要漂洗两次,离心三次
答:
漂洗两次,是尽量去除多的杂质,最后一次离心是去除所以的酒精,有乙醇残留,会影响下游的酶促反应啊
PCR产物
问题
答:
模板是什么?基因组么?两次用的模板是一批做的么?时间长的话模板可能会降解
怎么提高
PCR的
成功率
答:
针对目的蛋白的氨基酸序列,设计引物做PCR,突变的氨基酸就在引物中,
PCR产物
即为突变后的DNA序列。如果目的蛋白是构建的质粒转染表达感受态,那可以选择目标蛋白的质粒为模板;PCR产物只是线性的片段。并且包含甲基化的模板,需要用DpnI消化酶消化掉模板然后重组,重组是将线性的片段重新变为完整质粒环的过程;...
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