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基因克隆设计引物
用原核载体
克隆
并表达一种生物中的某个
基因
(序列已知),这种生物若是一...
答:
首先不管是真核还是原核的靶
基因
,只要对表达菌没有太大损伤,都能在原核表达,前几天我表达一个蛋白一直不成功,就有可能是因为这个蛋白是一种原核胞内酶,对细胞有毒性作用。然后
设计引物
将序列已知从细菌或者真核细胞细胞PCR扩增出来(当然了,要先提取基因组),将扩增出来的产物连进
克隆
载体,转进...
为什么我们
基因克隆
老失败
答:
1 建议你直接切PCR产物,在酶切位点两端加2~3个保护碱基再切。这样避免两次纯化的麻烦。我都是这么做的。2 你的T载体连接成功了么?就是有没有拿到重组T载体?3 你用的是Taq还是高保真聚合酶?如果是Taq的话当心是在
引物
区或酶切位点造成点突变使得切不动。
做细胞转染,预筛选稳定
克隆
,不表达怎么办
答:
我不知道你的目的基因来源,如果不是来源于一个完成的ORF的话,比如病毒基因的一些NSP,往往是一个大ORF表达一个多聚蛋白,然后剪切生成很多的小蛋白,这种时候需要你预测你的目的基因的起止位置,如果出错的话,即便你能正确的把
基因克隆
进载体,也无法得到表达。需要你
设计
新的
引物
,削减或者是添加一小...
cdna第一链合成的基本策略
答:
2、填补
基因
组序列中的缺口:在基因组研究中,有时会遇到一些难以测序的复杂区域,这些区域可能包含大量的重复序列或者高GC含量。cDNA第一链合成可以解决这个问题,通过逆转录和
克隆
cDNA文库,我们可以获得这些复杂区域的完整序列信息。3、克隆cDNA文库:cDNA第一链合成也是构建cDNA文库的关键步骤。cDNA文库是...
请教一个分子遗传学的问题,关于单突变鉴别和分离
克隆
的实验问题_百度知 ...
答:
2)中技术方案:从各大数据库中搜索与水稻株高控制相关的
基因
,将相关的基因分别
设计引物克隆
出来,检查有没有SNP;或者用核酸探针杂交,或用基因芯片进行高通量测定,找到突变的基因。最后依然是设计引物克隆之。3)中技术方案:由于突变之后蛋白的表达量,分子量,等电点都可能会发生变化,可以做蛋白二维...
BLAST
设计引物
的问题?
答:
这个参数其实是选定物种,你可以尝试在第一次
设计
的时候,只添加你做的果树的物种的拉丁名去检索。获得理想的序列以后,用病毒的
基因
组去blast,确认你的
引物
序列在里面没有,或很少有同源序列就好了。如果确认你的样品中有这个序列,引物用primer设计过没有问题,最好能够查看一下:1.样品制备的问题,...
pcr的基本原理
答:
1、PCR的优点是快速,灵敏,准确,只需极少样品即可进行扩增,适用于微量DNA片段的分析而不必耗费大量的精力去提取DNA,并且还具有根据
设计
合成任意长度的DNA片段的优势。2、PCR可以应用于DNA序列检测,基因突变分析,DNA指纹图谱生成,
基因克隆
等多种方面,并广泛应用于医学,生物学,食品安全等领域。
生物学实验--电泳
答:
1.
设计引物
很关键。一般如果是定向
克隆
,用载体上的通用引物即可;如pET系列可用T7通用引物。如果是非定向克隆(如单酶切或平末端连接),一条引物用载体,一条引物用目的
基因
上的,这样就可以比较方便的鉴定了,而且错误概率很低。PCR条件的选择接近最佳,同时挑取的菌体不宜太多,否则会有非特异性...
原核表达载体和真核表达载体的区别
答:
三、获得目的
基因
方式不同:pEGFP-N1载体从结构上看,质粒具有很强的复制能力,可以满足随宿主细胞分裂时跟随胞质遗传给新生的子细胞,这是真核细胞表达载体保证目的基因稳定表达的因素之一。原核表达载体获得目的基因:1、通过PCR方法:以含目的基因的
克隆
质粒为模板,按基因序列
设计
一对
引物
(在上游和下游...
求分子
克隆
具体实验步骤一份~~多谢各位大侠啦~
答:
4、可变区序列因细菌不同而异,恒定区序列基本保守,所以可利用恒定区序列
设计引物
,将16S rDNA片段扩增出来,利用可变区序列的差异来对不同菌属、菌种的细菌进行分类鉴定。16SrDNA鉴定是指用利用细菌16SrDNA序列测序的方法对细菌进行种属鉴定。包括细菌
基因
组DNA提取、16SrDNA特异引物PCR扩增、扩增产物纯化、DNA测序、...
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