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pcr产物做二次pcr
PCR产物
可以再重复PCR吗
答:
PCR产物
可以再重复PCR吗 你好,只要你用高保真酶,没事的。还有紫外照射会引起突变,不要拿紫外照太长时间哦。
pcr的产物
可以不可以直接拿来做模板再进行pcr
答:
一般不建议这样做。除非你做巢式
PCR
。以
PCR产物
作为模板,首先必须保证你的PCR产物经过纯化,成分单一,因此,无论怎样,第一轮PCR产物都要进行纯化,并且必须使用高保真酶以减少碱基错配的可能。这样才能以第一轮PCR产物为模板进行第二轮扩增。(用于巢式
pcr
)....
二次PCR
需要注意什么问题
答:
>>>
二次PCR
实际上与AFLP基本一样,做AFLP一般要进行预扩增和选择性扩增,而选择性扩增就是二次PCR。有时在预扩增后直接取样品做选择性扩增,条带数很少,而且在PAGE觉上染色不明显,背景很深。预扩增后的
产物
稀释至少10-20倍,有时甚至要稀释100倍才能在选扩时候扩增出来DNA条带,这样扩增出来的...
PCR产物
回收后,作为再次
PCR的
模板,为什么不可以?我反复扩增几次都失败...
答:
我想你是用高保真酶扩增的,那么高保真没产物一般都没有A尾巴,但是如果想要A尾巴做TA克隆,可以直接在
PCR产物
上加-A,体系是(PCR回收产物,Taq酶,水,dATP,Taq PCR buffer),直接72度延伸20min即可。如果你仍想继续以回收产物为模板,那么要先检测你的条带是否为目的基因或是否有回收到产物,如果...
加了loadingbuffer的
pcr产物
还能用来
二次pcr
答:
可以。加了loadingbuffer的
PCR产物
仍然可以用于
二次PCR
。loadingbuffer的作用主要是使PCR产物在电泳时能够更好地分离和观察,并不会影响PCR产物的扩增效果。
取第一
次pcr的产物
作为第
二次pcr
的模板,这种做法有理论支持吗,求参考...
答:
文献没有, 但是我们一般都做这样的实验。 第
二次
扩出来的条带很亮
以第一轮
产物
为模板进行第二轮
PCR
,结果产物条带弥散是什么原因?_百度...
答:
1,引物设计不好,这种情况下肯定不行,换引物。
2
,你的模板有问题,可能是浓度太低或者是杂质过多抑制了酶的活性,解决办法是换好的酶或者缓冲液,或者是(这个更靠谱))设计巢式引物做巢式
PCR
,如果引物设计的好,基本就ok了;如果还是做不出来,那就有可能是模板降解或者是你这个片段在模板上就...
PCR产物
作为模板继续PCR反应,稀释前后产物不同,怎么回事?
答:
况且第一轮
PCR的产物
中会有很多不需要的组分,因此第一轮的产物通常都要进行稀释后作为第二轮的模板,稀释100倍是起步,另外你的PCR体系模板量太大了,10%的模板是很多的,会引入大量第一
次PCR
的杂质,一般加1~2微升即可。另外第二轮PCR通常设计的引物退火温度要大于第一轮比较好 ...
pcr产物
可以直接再次pcr吗
答:
PCR产物
可以再重复PCR吗 你好,只要你用高保真酶,没事的。还有紫外照射会引起突变,不要拿紫外照太长时间哦。
二次PCR产物
,电泳条带与第一次PCR一样不明显,如何解决
答:
首先你的确认你没有用错东西。如果没有问题,
二次PCR的
话,那得看你的延伸时间和退火温度了。2轮的退火温度最好调高些,以增强特异性。延伸时间上,看你的
产物
大小。如果需要大条带,那延伸时间意义不大,最好能对一轮产物进行预期条带的回收后再
做2
轮,或者进行巢式PCR;要是需要小条带那就简单...
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