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质粒转染293t细胞步骤
293A和
293T细胞
以及
293细胞
有什么区别吗
答:
1. 养
293细胞
和293T一样。以293T为例,预先准备3个T150瓶的
293T细胞
,培养基为DMEM + 10% FBS,1% Glutamax ,1% 青霉素-链霉素。2. 将细胞分到12分到12个T150瓶中,每瓶的细胞密度是8×106个。3. 第二天,镜下检查细胞。细胞融合度应大致为30-40%,分布均匀。4.
转染
前1小时,取出细胞...
转染293t
多长时间能产生慢病毒
答:
一般认为,在
转染
后的第24~48 h之间,是慢病毒的生产高峰,这时病毒产生速率高于降解速率。可以在这个时间收获第一批慢病毒,此时也是滴度最高的时候。在随后的 48~72 h中,包装依然持续进行,但滴度下降(生产能力下降,但降解速率不变)。从产量角度而言,在这24 h内,可以使用小体积的培养基收获1~...
293T细胞
为什么经常用于
转染
,蛋白质表达
答:
293T细胞
由
293细胞
通过基因技术派生出的细胞系,是经过腺病毒E1A基因的
转染
,能表达SV40大T抗原,含有SV40复制起始点与启动子区。/iknow-pic.cdn.bcebos.com/bd315c6034a85edf33391aff47540923dc5475b1"target="_blank"title="点击查看大图"class="ikqb_img_alink">/iknow-pic.cdn.bcebos.com/bd315c...
什么是
293T细胞
?
答:
7、加适量的培养液混匀, 这时候在显微镜下观察, 可见大多数细胞都是单个的, 只有少量的2~3个细胞聚在一起。一般
293T 细胞
可以长在塑料的培养瓶底面上直到90% 融合, 再以1∶4~1∶8 的比率传代。合适的传代周期为2~3 天。8、传代
过程
中, 消化的时间越短越好, 显微镜下观察到80%细胞脱落即可...
HEK-
293T
人体肾脏
细胞
系(STR鉴定)
答:
HEK-
293T细胞
是293T(293tsA1609neo)细胞系(ATCC CRL-11268)的衍生物。细胞持续表达SV40抗原,该细胞常用于
转染
实验,转染效率较高。(转染一般以50%密度铺板,待细胞刚刚贴到皿壁上后(一般8-10小时),即可进行转染操作)2) 形态:上皮细胞样,贴壁生长 3) 含量:>1x106 个/mL 4) 污染...
细胞
培养及
转染
Protocol
答:
三、
步骤
:(一)材料准备:(二)
细胞
传代步骤:(一)细胞冻存 6、 注意事项:实验四
转染
(1) 胰酶消化细胞并计数,接种至100mm培养皿中,使其在转染日密度为60%-70。底面积为100 mm的细胞培养皿,每个皿内最大容量加入24.0μg
质粒
DNA,用1.5 mL无血清培养基稀释,混合在室温下放置5 min...
CRISPR/Cas9基因敲除实验全记录(5)
293
F
T细胞转染
验证 and trouble shoot...
答:
(1)sgRNA+pSpCas9载体用lipofectamine 3000
转染
至
293
F
T细胞
(按照转染试剂的说明书走),确保转染效率> 70%; (2)72 h后收集细胞提取基因组DNA(按照基因组DNA提取试剂盒的说明书操作); (3)使用事先设计好的引物进行PCR扩增,这里使用的酶是NEB公司的Q5 high-fidelity Polymerase,一切按...
慢病毒包装的简要流程
答:
慢病毒包装简要流程:1)含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和
质粒
纯化提取。2)慢病毒载体,包装系统共
转染
病毒包装
细胞293T
等。3)培养48hrs-72hrs左右,收集含有病毒的上清培养液。4)病毒的纯化和浓缩。5)分装、-80℃保存。6)滴度测定目的基因鉴定。如需了解更多慢病毒感染细胞实验信息,请咨询...
如何养293、
293T
系列的
细胞
?
答:
将
细胞
培养瓶竖立放置,吸走培养基,如果培养基中的脱落细胞较多,说明细胞现在很容易脱落,只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%),来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落,加入10mlMEM,混匀,不能吹打,分装2瓶。如果细胞没长满就脱落,则只需加入5mlMEM,不分装。如果培养瓶中的细胞贴壁较牢固,培养基上清没...
细胞
培养
过程
中50ml离心管可以上下颠倒混匀吗
答:
可以左右摇晃混匀
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