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没有引物二聚体
PCR之后电泳
没有
条带,连
引物二聚体
都没有?这是怎么回事了?
答:
没出现引物二聚体只能说你设计的两端的引物 没有错配啊
等等 你可以找有经验的师兄师姐帮你设计引物 看看 顺便啊学习一下引物设计的经验 引物到了之后,你可以先跑个沉降PCR 看看 比较适合退火温度 我也听师兄说过 可以跑个 TOUCHDOWN 另外 你可以把Mg离子以及DNTP 还有各个溶剂的量 调高一...
什么是
引物二聚体
答:
2、引物二聚体的出现是必然的,只是或多或少的问题,电泳时看不到引物二聚体带也不代表没有二聚体出现
,只是含量低我们 的肉眼看不到而已。提高PCR严谨性(包括提高退火温度,降低引物浓度等)可大大降低二聚体的浓度。
引物二聚体
在设计的时候 是不可避免的么?
答:
至于后面的PCR反应时的实际情况,要试了才知
引物二聚体
的形成不单单是在引物设计的时候,后面的PCR扩增条件的不适也会造成引物二聚体的出现。摸索下后面的PCR条件,引物设计软件只能告诉你现在设计的引物之间的配对,发卡结构等问题。至于后面的PCR ... 我设计的单链DNA不是用来做PCR的,只是为了不让...
什么是
引物二聚体
引物二聚体介绍
答:
1.
引物二聚体
是引物3端不匹配放大形成的。2. 引物二聚体的出现是必然的,但这或多或少是个问题。电泳时引物二聚体带的缺失并不意味着
没有
二聚体,而是其含量低,我们肉眼是看不到的。提高PCR的严格程度(包括提高退火温度和降低引物浓度)可以大大降低二聚体的浓度。
最近RT-PCR,
没有
目的条带,但是孔很亮,连
引物二聚体
也没有,但是marker正 ...
答:
有扩增曲线的话,CT值不是太高在20~30之间属于正常(40个循环)。如果连曲线都
没有
的话就是扩不出来。如果曲线什么都正常的话,建议重新配制一块符合自己目的条带大小的琼脂胶重新电泳。
pcr有目的条带
没有引物二聚体
正常么?
答:
利用基因复制的原理的PCR扩增技术。因此,为了充分利用互补碱基配对(AT,CG)来复制靶基因。
如何减少和避免
引物二聚体
答:
9.若降低退火温度,发现还是只有
引物二聚体
,而且镁离子的浓度在20-25mmol/l
没有
区别,则考虑 Buffer等试剂没有完全融解、混匀,导致吸取的试剂浓度不对。10.以上次的pcr产物作模板二次pcr,可以提高引物与模板的特异性,减少
引物二聚 体
,如果两次时间间隔短的话,可以把原产物稀释100-1000倍,如果...
怎样消除
引物二聚体
答:
首先在设计引物的时候,要注意避免产生
引物二聚体
.现在的引物设计软件都会有一个dimer的选项,可以看出你设计的引物是否会发生二聚体.如果会形成二聚体,并且序列不能有大的变动,那就注意一下在3'端别发生dimer的互补.其次,在PCR时提高退火温度可以提高PCR的特异性,可以减少引物二聚体.
PCR跑不出条带是什么原因
答:
先解决阳性对照再考虑你的目的基因。阳性对照都没有的可能性有两种,阳性对照模板有问题,pcr体系的问题(包括引物的问题)。看你的内参下面
没有引物二聚体
,那后面泳道里最下面的那一道就是引物二聚体了。pcr失败的原因太多了,试剂有问题,或者条件有问题,第一次用一个引物,建议做梯度 ...
什么是
引物二聚体
?
答:
引物二聚体
的形成主要是由于引物设计不合理或反应条件控制不当造成的。在PCR过程中,引物需要与模板DNA结合,进行DNA的复制和扩增。但如果引物自身存在互补序列,这些互补序列就会在PCR过程中相互结合形成双链结构,导致出现引物二聚体。这种双链结构不仅会影响PCR反应的特异性,还会降低PCR反应的效率和准确性...
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减少引物二聚体
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