PCR扩增产物拖尾、有二聚体可不可以继续做酶切

如题所述

举报该问题

第1个回答 2012-11-29

将产物切胶回收纯化后完全可以。

第2个回答 2012-11-29

摸索条件，重新PCR来自：求助得到的回答本回答被提问者采纳

第2个回答 2012-11-29

只要不影响你的目的条带应该没关系

相似回答

如何设定PCR引物的保护碱基?如何对PCR扩增的产物进行酶切?答：一般酶切鉴定30分钟就可以了。要完全酶切可以采用少量的酶长时间反应,或较高的酶量短时间处理都可以达到。在使用高酶量的时候需要注意甘油的最终浓度不要超过5%,也就是说10ul的体系,酶的用量不要超过1ul。10)是否和如何终止反应?酶切鉴定之类的实验不需要特殊处理。灭活的手段:加入高浓度的EDTA;65度或80度热处...

我扩增的菌液能扩增出来条带,但是做酶切切不出来目的条带?怎么回事_百 ...答：④引物设计不合理，如引物长度不够，引物之间形成二聚体等。Mg2+浓度：Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。反应体积的改变：通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul。或100ul，应用多大体积进行PCR扩...

pcr总是p不出来,有什么需要注意的吗答：如果问题出在模板上，需要重新抽提基因组DNA，电泳检测抽提效果，最好能够DNA定量后再继续进行PCR。如果确定引物有问题，可以重新合成引物。因为16S的引物多半是通用型的，所以实验条件上需要改动的地方并不多，退火温度可能变动几度就好了。但引物降解有可能造成扩增失败。一样样试过吧 ...

在做PCR时,出现引物二聚体答：7. PCR反应体系的配制在冰上进行，最后加TAq酶，PCR结束后，产物勿放置在室温下过长时间，有人认为室温下有些TAQ酶会将多余的引物合成为二聚体；8. 增加循环数；9. 降低退火温度后有条带，则应逐渐提高温度，若提高温度的同时产物量减少，则考虑增加镁离子浓度（根据扩增片断长度而定，片段长则相应...

求助:关于PCR的问题答：④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。 ⑤引物3’端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。 ⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点,这对酶切...

请问一下PCR中的一些技巧答：7. 引物二聚体及发夹结构的能值过高(超过4.5kcal/mol)易导致产生引物二聚体带,并且降低引物有效浓度而使PCR 反应不能正常进行[8]。 8. 对引物的修饰一般是在5’端增加酶切位点,应根据下一步实验中要插入PCR 产物的载体的相应序列而确定。值得一提的是,各种模板的引物设计难度不一。有的模板本身条件比较...

PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳时,所有样都不出现条带,而是弥散状的,从投...答：“从头拖到尾，另外一对引物就能做出来”说明不是引物之间形成二聚体，而是第一对引物的设计有问题（特异性很差）。如果一定要扩增那个区，建议引物的位置向两边放一放。如果你没有好的设计软件，建议到Primer3去试试（目前最好的免费引物设计）。如果还是不行，把序列发给我，我帮你设计（我有专业...

我扩增的菌液能扩增出来条带,但是做酶切切不出来目的条带?怎么回事?在 ...答：④引物设计不合理，如引物长度不够，引物之间形成二聚体等。Mg2+浓度：Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。反应体积的改变：通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul。或100ul，应用多大体积进行PCR...

大家正在搜

pCR扩增是二聚体 d二聚体是什么的降解产物酶切产物能不能直接连接酶切产物电泳多少体积酶切产物纯化酶切产物保存酶切后的产物为何必须进行纯化酶切产物纯化浓度低双酶切产物怎么保存