第1个回答 2024-06-13
分子生物学在目前医学研究领域算是前沿科技,而44pcr检测技术是其中之一,在临床医学应用比较广泛。44pcr检测技术主要用于对基因序列的分析,检测肿瘤、癌细胞和遗传病等发生过程。它的特点是在短时间之内可以检测到突变的基因,对于复杂的基因组织也有迹可循,而且易于和其它基因检测手段结合使用,所以在医学研究应用领域受到广泛应用。
PCR在在突变检测基因的应用:
一、点突变的PCR直接检出
(一)用PCR直接检测缺失:
当基因内缺失时,可用已知的该基因DNA序列在缺失片段的两侧设计一对引物,然后进行PCR,对其产物行琼糖凝胶电泳,溴乙锭染色,紫外检测仪下检测有无特异 性的扩增产物,即可非常容易的判断待检称本中有无DNA片段的缺失。
1. 一对引物PCR检测缺失如果一个基因的DNA序列已经清楚,其缺失部位亦较为固定,即可根据缺失发生区域的DNA序列在缺失片段的两侧合成一对合适的引物进行PCR,然后琼脂糖凝胶电泳及溴乙锭染色,短波紫外灯下观察有无特异性的扩增片段,该方法是检测基因片段缺失最为快速的方法。
2. 多对引物的多重PCR检测缺失。
3. 用PCR技术进行杂合性丢失的检测。
(二)单个碱量置换的PCR直接检出
1. 直接检测限制性内切酶切点的变化-PCR产物酶解分析 。
2. 3'特异PCR,扩增阻滞突变系统及等位特异PCR。
3. 3.PCR直接测序。
4. PCR-寡核苷酸探针斑点杂交(PCR-ASb)。
二、用PCR技术快速筛查突变基因
前边所述及的方法均可直接检出突变部位,而其前提则是突变的性质和部位必须清楚,但在许多情况下,基因突变的位点不固定,而且性质亦不是非常清楚,因此就需要用一些快速简便的筛查方法以确定检材中有无基因突变,近年来,以PCR技术为基础建立起来的突变快速筛查技术已普遍应用于肿癌及遗传病基因突变的检测。
(一)PCR-单链构象多态性
(二)变性梯度胶(DGGE),恒定变性胶(CGGE)及温度(TGGE)检测基因突变。
总之,以PCR技术为基础建立的基因突变检测技术有多种,而且各有其优缺点, 但目前较为广泛应用的为PCR-SSCP,PCR-ASO及PCR循环直接测序,随着新方法的不断出现,将会大大的促进基因突变的研究。