革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,1884年由丹麦医师Gram创立。细菌先经碱性染料结晶染色,而经碘液媒染后,用酒精脱色,在一定条件下有的细菌不脱色,有的可被脱去,因此可把细菌分为两大类,前者叫做革兰氏阳性菌(G+),后者为革兰氏阴性菌(G-)。为方便观察,脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染。阳性菌仍带紫色,阴性菌则被染上红色。芽孢杆菌和绝大多数球菌,以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏阳性反应;弧菌、螺旋体和大多数致病性的无芽孢杆菌都呈革兰氏阴性反应。
两者的区别:①细胞壁组成成分不同。革兰氏阳性菌细胞壁含大量的肽聚糖,含磷壁酸,不含脂多糖;革兰氏阴性菌含极少肽聚糖,含脂多糖,不含磷壁酸。两者的不同还表现在各种成分的含量不同,尤其是脂肪含量明显不同,革兰氏阳性菌脂肪含量为1%~4%,革兰氏阴性菌脂肪含量为11%~22%。
②细胞壁结构不同。革兰氏阳性菌细胞壁较厚,为20~80nm,结构较简单。革兰氏阴性菌细胞壁较薄,为10nm,其结构较复杂,分为外壁层和内壁层;外壁层又分3层,最外层是脂多糖,中间是磷脂层,内层为脂蛋白,内壁层含肽聚糖,不含磷壁酸。
自然界中,细菌的种类很多,有些细菌形态特别相似,不易辨别。为了进行区分,人们对细菌采用了许多染色法,其中最常用的一种染色法叫做革兰氏染色法,它可将细菌染成不同的颜色,根据所染的颜色,可将细菌分成两类。革兰氏染色方法是:取待染色的细菌或病理材料涂片,在酒精灯上火焰固定后,先用结晶紫染液初染1分钟,然后用蒸馏水将染液冲洗干净(此时所有细胞都染成紫色),再用碘液媒染1分钟(以增强染料与细菌的亲和力),用蒸馏水冲洗后,用盐酸酒精溶液脱色30秒,此时,有的细菌不被脱色,仍保留紫色,有的细菌易被脱去紫色,变成无色,最后用沙黄液(红色)复染1分钟,已被脱色的细菌染成红色,未被脱色的细菌仍为紫色。经过这一方法染成紫色的细菌,称为革兰氏阳性菌,染成红色的称为革兰氏阴性菌。
革兰氏染色法的意义除能鉴别细菌,诊断传染病外,革兰氏阳性菌大多数对青霉素敏感,而革兰氏阴性菌则对青霉素不敏感,但对链霉素敏感,这对临床治疗中选择抗菌药物有着重要意义。
表37 常见病原菌的革兰氏染色法分类282261染色反应 菌体形态 革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌 球菌 葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌 杆菌 炭疽杆菌、破伤风杆菌、产气荚 大肠杆菌、沙门氏菌、 膜杆菌、猪丹毒丝菌、李氏杆菌 巴氏杆菌、布鲁氏菌、坏死杆菌 螺形菌 弧菌
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