革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立。细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌不脱色，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G-）。为方便观察，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。芽孢杆菌和绝大多数球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏阳性反应；弧菌、螺旋体和大多数致病性的无芽孢杆菌都呈革兰氏阴性反应。
两者的区别：①细胞壁组成成分不同。革兰氏阳性菌细胞壁含大量的肽聚糖，含磷壁酸，不含脂多糖；革兰氏阴性菌含极少肽聚糖，含脂多糖，不含磷壁酸。两者的不同还表现在各种成分的含量不同，尤其是脂肪含量明显不同，革兰氏阳性菌脂肪含量为1%～4%，革兰氏阴性菌脂肪含量为11%～22%。
②细胞壁结构不同。革兰氏阳性菌细胞壁较厚，为20～80nm，结构较简单。革兰氏阴性菌细胞壁较薄，为10nm，其结构较复杂，分为外壁层和内壁层；外壁层又分3层，最外层是脂多糖，中间是磷脂层，内层为脂蛋白，内壁层含肽聚糖，不含磷壁酸。
自然界中，细菌的种类很多，有些细菌形态特别相似，不易辨别。为了进行区分，人们对细菌采用了许多染色法，其中最常用的一种染色法叫做革兰氏染色法，它可将细菌染成不同的颜色，根据所染的颜色，可将细菌分成两类。革兰氏染色方法是：取待染色的细菌或病理材料涂片，在酒精灯上火焰固定后，先用结晶紫染液初染1分钟，然后用蒸馏水将染液冲洗干净（此时所有细胞都染成紫色），再用碘液媒染1分钟（以增强染料与细菌的亲和力），用蒸馏水冲洗后，用盐酸酒精溶液脱色30秒，此时，有的细菌不被脱色，仍保留紫色，有的细菌易被脱去紫色，变成无色，最后用沙黄液（红色）复染1分钟，已被脱色的细菌染成红色，未被脱色的细菌仍为紫色。经过这一方法染成紫色的细菌，称为革兰氏阳性菌，染成红色的称为革兰氏阴性菌。
革兰氏染色法的意义除能鉴别细菌，诊断传染病外，革兰氏阳性菌大多数对青霉素敏感，而革兰氏阴性菌则对青霉素不敏感，但对链霉素敏感，这对临床治疗中选择抗菌药物有着重要意义。
表37 常见病原菌的革兰氏染色法分类282261染色反应 菌体形态 革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌 球菌 葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌 杆菌 炭疽杆菌、破伤风杆菌、产气荚 大肠杆菌、沙门氏菌、 膜杆菌、猪丹毒丝菌、李氏杆菌 巴氏杆菌、布鲁氏菌、坏死杆菌 螺形菌 弧菌
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