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    • 转化实验中，加入氯化钙制备感受态，为什么要在冰浴中加，是什么原理？

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    第1个回答  2019-04-03
    在冰里降低细胞膜流动性，热激的时候使膜孔张开，便于质粒进入
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    以氯化钙法制备的感受态细胞转化DNA时,冰浴15分钟的主要目的是什么?答：【答案】：冰浴的目的：①抑制细胞的生理代谢；②有助于DNA形成羟基钙磷酸复合物吸附于细胞表面；③防止。DNase降解DNA。热休克温度是42℃；目的是使细胞摄入吸附于其表面的DNA。
    制作感受态细胞时,氯化钙悬浮细胞后为什么要冰上放置片刻?答：通常在制备大肠杆菌的感受态时，放置30分钟，是为了让原来的细胞在氯化钙的作用下，变得更易接受外源DNA，为了达到这种效果，就需要在冰上放置。
    氯化钙法的分析原理答：原理：目前，感受态细胞的制备常用冰预冷的CaCl2处理细菌的方法制备，即用低渗CaCl2溶液在低温（0℃）时处理快速生长的细菌，从而获得感受态细菌。此时细菌膨胀成球形，外源DNA分子在此条件下易形成抗DNA酶的羟基－钙磷酸复合物粘附在细菌表面，通过热激作用促进细胞对DNA的吸收。转化效率可达106－107转化子/...
    氯化钙制备感受态细胞的原理答：具体原理如下：将快速生长的大肠杆菌置于经低温（0℃）预处理的低渗氯化钙溶液中，便会造成细胞膨胀，同时钙离子会使细胞膜磷脂双分子层形成液晶结构，促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来。离开所在区域，诱导细胞成为感受态细胞细胞膜通透性发生变化，极易与外源DNA相粘附并在细胞表面形成抗脱氧...
    制备感受态细胞时为什么氯化钙要冷冻答：不知道您到底想知道什么？制备感受态细胞当然要冷冻啦，冷热交替使得细胞壁很脆弱，这样外源DNA导入才更加容易。在制备转基因时，导入外源DNA方法有很多的，不过目前比较简单和普遍的做法就是用氯化钙处理的。谢谢！
    在做转化时,外源DNA与感受态细胞混匀后为什么要冰上放置30分钟后热激...答：这是用热激法进行的转化。以大肠杆菌为例，大肠杆菌在0摄氏度的氯化钙低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基—钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42摄氏度短时间热冲击处理，促进细胞吸收DNA复合物，在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增殖。所以需要先冰上放置30...
    用氯化钙怎样制备新鲜的大肠杆菌感受态细胞?答：CaCl2重悬每份沉淀，放置于冰浴上。我们发现将1mol/L CaCl2贮存液用纯水(Mille-Q级或与其相当的级别)配制以10ml小份贮存于-20℃煞是方便。制备感受态细胞时，取一小份融化，用纯水稀释至100ml，用Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌，然后骤冷到0℃即可。对于大多数大肠肝菌菌株(除MC1061外)...
    氯化钙制备感受态细胞的原理答：诱导细胞产生感受态。利用氯化钙处理细胞，使细胞膜通透性增加，进而引发细胞内钙离子浓度升高，从而诱导细胞产生感受态是氯化钙制备感受态细胞的原理。
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