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跑过一次pcr还能跑第二次吗
跑RT-
PCR
的时候显示选择
了2
个内参,但是结果不是很理想,我又加了两...
答:
……你说的好抽象……你说的不理想是什么不理想?你重复
了
几次?再加了两个说完全不一样是怎么个不一样……首先,我对你写的RT
PCR
理解是QPCR……其次,你的内参是否有参照已发表过的文献?再不行就很有可能是你的RNA样品污染有降解……
你好;我有两个片段,想先连接后在做
pcr
,可是一直扩不出来,你
可以
告诉我...
答:
你这两个片段是通过T4链接酶接的吗 连接
完
之后,是否跑电泳
了
呢 确定接上了吗 如果接上了,不应该
PCR
不出来啊
跑PCR
时,如果只加一条引物,能扩增出来吗
答:
不能出来吧,如果扩出来,量也很少。因为只有一条模板,最终还是一样的量
...基因的引物加的量相同吗,能否放在同一管中
跑PCR
答:
引物加的量应该相同,能放在一管里跑最好,但是分开跑也可以接收(一般都是这样)
为什么有的在跑电泳之前,
PCR
产物要在94°C变性5min,作用是什么呀_百度...
答:
电泳的目的是看DNA片段的长度,而电泳上DNA移动速度除了受片段长度的影响还受到其结构的影响.让DNA变性,所有样品都是线形DNA。 这时所有电泳上所有DNA的移动速度只和其长度有关。
PCR
产物跑胶严重拖尾,换
了
好几种酶和体系也还是一样,(Tm为55,循环25...
答:
引物不合适吧,要不就是退火温度太低,或者模板量太多
请问
PCR
产物室温下放置一个星期会全部降解吗?
答:
不建议这么做,
pcr
产物的话大部分的都会降解的,我有
一次
把pcr产物放在-20度里四天都有降解的情况。建议跑胶回收纯化后保存。
PCR跑
不出条带
答:
回答:
PCR
没有产物的原因可能有: 1)引物参数及引物和模板的匹配; 2)模板的质量,可以用其他引物作为阳性对照; 3)反应条件; 4)酶失活; 5)电泳条件; 根据你的说法,引物和PCR条件应该是没有问题的,那么没有条带,是完全是黑的还是很弥散拖着的呢?你应该考虑一下酶是否失活的问题,或者是胶的浓度合不...
模板CDNA
可以跑
出目标片段,
PCR
扩增后却跑不出来
答:
lu3002说的对,扩增得到的cDNA应该是弥散带,你跑出目的条带说明扩增的对,一般扩增出来的cDNA并不需要电泳,而是直接进行扩增。你的cDNA很明显是出现了降解或者没有扩增成功,建议重新制模板。
PCR
加好样后不马上跑,应放在多少度?4℃,还是-20℃更好些?
答:
如果在短时间(一天)之内要跑电泳的话建议4度保存,如果要几天或是更长时间的话建议-20度保存,当然如果一定要放4度也没关系,我以前有一个样品在4度放
了2
个月,也没有明显变化。
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