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知道基因序列怎么设计引物
pcr扩增目的基因时不必
知道基因
的全部
序列
这是为什么
答:
因为pcr只要
知道
目的
基因
前后的
序列
用以
设计引物
就可以了,中间的目的序列自然会在
DNA
聚合酶的作用下根据碱基互补配对合成。
关于
引物
和目的基因的关系。针对某
基因设计
的同一对引物在不同人的基 ...
答:
这样就可以判断是否有突变 2. 针对点突变或者
基因
多样性,还可以进行探针荧光实时PCR。
引物
还是在位点的两侧,但是针对不同的目标核苷酸,探针的
序列
不一样。不同的探针上标记的荧光也不一样。这样,PCR时,不同序列在反应中测得的荧光也不一样,就可以
知道
各个序列的比例数量了。
克隆一个未知的
基因
拿到
序列
需要多久?
答:
在设备齐全的情况下,从最初分析开始呢,需要的时间大体是:1 分析
序列
,
设计
简并
引物
,送公司合成引物需要等4-5天。等的过程中提取RNA和反转录时间足够了。2 引物合成送到后,使用制备好的脑 cDNA模板利用简并引物进行PCR,然后电泳检测,这个阶段紧凑的话1-2天。3 如果成功克隆出了目的条带,那么...
怎样
克隆启动子和测定其
序列
?步骤尽量说详细点
答:
并且两端带有了特定的接头-clontech公司试剂盒);
设计引物
,在目的
基因
的5‘UTR设计一对往上游扩增的槽式引物(GC含量、Tm值尽量高,66度往上);PCR克隆,根据自己合成的槽式引物和genomic walking的模板末端加上的接头
序列
,PCR(一般都是用Touch DownPCR,根据槽式引物,扩增两轮,第二轮是以第一轮...
用pcr产物测的序列片段,一定能够在里面找到
引物序列
吗?
答:
那么找不到
引物
是很正常的,因为测序是从引物后边的
序列
开始的,并且开头的几十个碱基也是不可信的,所以如果LZ你只是进行了单向测序,那么找不到引物是正常的事情 如果LZ你的片段小于800的话进行双向测序后就可以找到引物了。如果比800大那么LZ可以分别从F和R方向上的结果中
设计
个引物往回测。
对于不
知道序列
的目的
基因
如何
来
设计
它的
引物
答:
不
知道序列
,知道是什么
基因
的话,可以根据物种之间的同源性在保守区域
设计引物
,然后再用race等技术扩全长,如果基因名字什么都不知道的话。。。那就图位克隆。。
pcr技术中需要添加的
引物
有几种
答:
底漆
设计
基本原则 1、
引物
长度:15-30bp,一般约20bp。2、引物碱基:g+c含量为40-60%,g+c太少扩增效果不好,g+c太多易出现非特异性条带。ATGC应随机分配,以避免超过5个嘌呤或嘧啶核苷酸。3、引物中不应有互补
序列
。4、两个引物之间不应有互补序列,特别是要避免3′端的互补重叠。5、引物与...
知道
蛋白
序列
,
如何
克隆这个
基因
答:
去NCBI查这个蛋白
序列
的碱基序列。取含有该
基因
的生物材料,用PCR的方法,克隆出该基因,用酶切、连接的方法整合到质粒载体中。
目的
基因
pcr检测原理是什么?
答:
目的
基因
PCR 分子生物学检测技术,通过扩增目的基因的特定区域来检测样本中是否存在该基因。其具体原理如下:PCR(聚合酶链式反应)是体外扩增
DNA
片段的技术,利用特定的
引物
(primer)和酶,在高温和低温循环条件下使 DNA 片段逐步扩增。目的基因 PCR 检测首先需要选定目标基因的特异性
序列
,并
设计
特异性...
...
DNA
用于表达时,并且本身没有启动子,那么
设计引物
时,5‘端增加的酶...
答:
你打算用载体上的启动子是吧,
设计引物
的时候,把目标序列cDNA全长都扩增进去就行了。上游引物肯定要有基因起始密码子的。不过,你的问题中,“5'端增加的酶切位点中”这句话有问题。5'端是需要增加酶切位点,但酶切位点都在
基因序列
区上游,上游引物是“酶切位点”然后紧接着“ATG……”。
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